氨基酸檢測？

你若是問蛋白質(zhì),我可以直接告訴你又雙縮脲試劑（中學(xué)階段）,但氨基酸的檢驗(yàn)比蛋白質(zhì)麻煩多了.一、氨基酸的分離和檢測氨基酸的分離和檢測手段,以往用化學(xué)分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動(dòng)分析儀.隨著高效液相色譜及填料的發(fā)展,HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優(yōu)越性.但大多數(shù)氨基酸無紫外吸收和熒光發(fā)射特性,為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性,通常將氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法與柱后衍生法.HPLC與各種衍生相結(jié)合的氨基酸分析技術(shù),構(gòu)成了具有廣泛適用性的現(xiàn)代氨基酸分析技術(shù).x0d二、鑒定是哪種氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反應(yīng) （ninhydrin reaction） 茚三酮（弱酸環(huán)境加熱） 紫色（脯氨酸、羥脯氨酸為黃色） （檢驗(yàn)α－氨基）x0d2、坂口反應(yīng) （Sakaguchi reaction） 丙氨酸x0dα-萘酚+堿性次溴酸鈉 紅色 （檢驗(yàn)胍基 精氨酸有此反應(yīng)）x0d3、米隆反應(yīng)（又稱米倫氏反應(yīng)） HgNO3+HNO3+熱 紅色 （檢驗(yàn)酚基 酪氨酸有此反應(yīng),未加熱則為白色）x0d4、Folin-Ciocalteau反應(yīng)（酚試劑反應(yīng)） 磷鎢酸-磷鉗酸 藍(lán)色 （檢驗(yàn)酚基 酪氨酸有此反應(yīng)）x0d5、黃蛋白反應(yīng) 濃硝酸煮沸 黃色 （檢驗(yàn)苯環(huán) 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應(yīng)）x0d6、Hopkin-Cole反應(yīng)（乙醛酸反應(yīng)） 加入乙醛酸混合后徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產(chǎn)生紫紅色環(huán) （檢驗(yàn)吲哚基 色氨酸有此反應(yīng)）x0d7、Ehrlich反應(yīng) P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍(lán)色 （檢驗(yàn)吲哚基 色氨酸有此反應(yīng)）x0d8、硝普鹽試驗(yàn) Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 （檢驗(yàn)巰基 半胱氨酸有此反應(yīng)）

pi時(shí)，氨基酸以什么形式存在’>氨基酸Ph>pi時(shí)，氨基酸以什么形式存在

氨基酸Phpi時(shí)，氨基酸主要以陰離子形式存在。

當(dāng)調(diào)節(jié)某一種氨基酸溶液的pH為一定值時(shí)，該種氨基酸剛好以偶極離子形式存在，在電場中，既不向負(fù)極移動(dòng)，也不向正極移動(dòng)，即此時(shí)其所帶的正、負(fù)電荷數(shù)相等，凈電荷為零，呈電中性，此時(shí)此溶液的pH稱為該氨基酸的等電點(diǎn)(isoelectric

point)，通常用pI表示。

在等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸主要以偶極離子的形式存在。

當(dāng)氨基酸溶液的pH大于pI時(shí)(如加入堿)，氨基酸中的一NH3+給出質(zhì)子，平衡右移，這時(shí)氨基酸主要以陰離子形式存在，若在電場中，則向正極移動(dòng)。

反之，當(dāng)溶液的pH小于pI時(shí)(如加入酸)，氨基酸中的一COO-結(jié)合質(zhì)子，使平衡左移，這時(shí)氨基酸主要以陽離子形式存在，若在電場中，則向負(fù)極移動(dòng)。

擴(kuò)展資料

各種氨基酸由于其組成和結(jié)構(gòu)的不同，而具有不同的等電點(diǎn)。中性氨基酸的等電點(diǎn)小于7，一般為5.0～6.5。酸性氨基酸的等電點(diǎn)為3左右。堿性氨基酸的等電為7.58～10.8。帶電顆粒在電場的作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)，稱為電泳(eIectrophoresis，EP)。

由于各種氨基酸的相對(duì)分子質(zhì)量和pI不同，在相同pH的緩沖溶液中，不同的氨基酸不僅帶的電荷狀況有差異，而且在電場中的泳動(dòng)方向和速率也往往不同。因此，基于這種差異，可用電泳技術(shù)分離氨基酸的混合物。

例如，天冬氨酸和精氨酸的混合物置于電泳支持介質(zhì)(濾紙或凝膠)中央，調(diào)節(jié)溶液的pH至6.02(為緩沖溶液)時(shí)，此時(shí)天冬氨酸(pI=2．98)帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動(dòng)，而精氨酸(pI=10.76)帶正電荷，向負(fù)極移動(dòng)

。

參考資料來源：百度百科——氨基酸

生物體中組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸

人體20種蛋白質(zhì)氨基酸在結(jié)構(gòu)上的差別取決于側(cè)鏈基團(tuán)R的不同。通常根據(jù)R基團(tuán)的化學(xué)結(jié)構(gòu)或性質(zhì)將20種氨基酸進(jìn)行分類

根據(jù)側(cè)鏈基團(tuán)的極性

1、非極性氨基酸（疏水氨基酸）8種

丙氨酸（Ala）纈氨酸（Val）亮氨酸（Leu）異亮氨酸（Ile）脯氨酸（Pro）苯丙氨酸（Phe）

色氨酸（Trp）蛋氨酸（Met）

2、極性氨基酸（親水氨基酸）：

1）極性不帶電荷：7種

甘氨酸（Gly）絲氨酸（Ser）蘇氨酸（Thr）半胱氨酸（Cys）

酪氨酸（Tyr）天冬酰胺（Asn）谷氨酰胺（Gln）

2）極性帶正電荷的氨基酸（堿性氨基酸）

3種

賴氨酸（Lys）精氨酸（Arg）組氨酸（His）

3）極性帶負(fù)電荷的氨基酸（酸性氨基酸）

2種

天冬氨酸（Asp）谷氨酸（Glu）

根據(jù)氨基酸分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1、

脂肪族氨基酸：

丙、纈、亮、異亮、蛋、天冬、谷、賴、精、甘、絲、蘇、半胱、天冬酰胺、谷氨酰胺

2、

芳香族氨基酸：苯丙氨酸、酪氨酸

3、

雜環(huán)族氨基酸：組氨酸、色氨酸

4、

雜環(huán)亞氨基酸：脯氨酸

人體內(nèi)的氨基酸分為必須氨基酸和非必需氨基酸，其中：

1、必需氨基酸（essential

amino

acid）：

指人體（或其它脊椎動(dòng)物）不能合成或合成速度遠(yuǎn)不適應(yīng)機(jī)體的需要，必需由食物蛋白供給，這些氨基酸稱為必需氨基酸。成人必需氨基酸的需要量約為蛋白質(zhì)需要量的20%～37%。共有10種其作用分別是：

賴氨酸：促進(jìn)大腦發(fā)育，是肝及膽的組成成分，能促進(jìn)脂肪代謝，調(diào)節(jié)松果腺、乳腺、黃體及卵巢，防止細(xì)胞退化；

色氨酸：促進(jìn)胃液及胰液的產(chǎn)生；

苯丙氨酸：參與消除腎及膀胱功能的損耗；

蛋氨酸（甲硫氨酸）：參與組成血紅蛋白、組織與血清，有促進(jìn)脾臟、胰臟及淋巴的功能；

蘇氨酸：有轉(zhuǎn)變某些氨基酸達(dá)到平衡的功能；

異亮氨酸：參與胸腺、脾臟及腦下腺的調(diào)節(jié)以及代謝；腦下腺屬總司令部作用于甲狀腺、性腺；

亮氨酸：作用平衡異亮氨酸；

纈氨酸：作用于黃體、乳腺及卵巢。

精氨酸：精氨酸與脫氧膽酸制成的復(fù)合制劑（明諾芬）是主治梅毒、病毒性黃疸等病的有效藥物。

組氨酸

人體雖能夠合成精氨酸和組氨酸，但通常不能滿足正常的需要，因此，又被稱為半必需氨基酸。

2、非必需氨基酸（nonessentialamino

acid）：指人（或其它脊椎動(dòng)物）自己能由簡單的前體合成，不需要從食物中獲得的氨基酸。例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。

氨基酸的Pk值是什么意思？怎么用啊

等電點(diǎn)：如果調(diào)節(jié)溶液的PH值使得其中的氨基酸呈電中性，我們把這個(gè)PH值稱為氨基酸的等電點(diǎn)：PI。PI是氨基酸的重要常數(shù)之一，它的意義在于，物質(zhì)在PI處的溶解度最小，是分離純化物質(zhì)的重要手段。等電點(diǎn)的計(jì)算：對(duì)于所有的R基團(tuán)不解離的氨基酸而言（即解離只發(fā)生在α-羧基和α-氨基上），計(jì)算起來非常簡單：PI＝（PK1’+PK2’）/2若是碰到R基團(tuán)也解離的，氨基酸就有了多級(jí)解離，這個(gè)公式就不好用了，比如Lys、Glu、Cys等。aa

Cys

Asp

Glu

Lys

His

ArgPK’α-羧基

1.71

2.69

2.19

2.18

1.82

2.19PK’α-氨基

8.33

9.82

9.67

8.95

9.17

9.04PK’-R-基團(tuán)

10.78（-SH）

3.86（β-COOH）

4.25（γ-

COOH）

10.53（ε-NH2）

6（咪唑基）

12.48（胍基）在這種情況下可以按下面的步驟來計(jì)算：

由PK’值判斷解離順序，總是PK1’

PK2’

PK3’

…，即誰的PK’值小，誰就先解離。

按照解離順序正確寫出解離方程式：簡式，注意解離基團(tuán)的正確寫法。

找出呈電中性的物質(zhì)，其左右PK’值的平均值就是氨基酸的等電點(diǎn)：PI＝（PK左’+PK右’）/2以Lys為例：在黑板上用簡式演示

等電點(diǎn)的測定：等電聚焦法：這是一種特殊的電泳，其載體上鋪有連續(xù)的PH梯度的緩沖液，然后將氨基酸點(diǎn)樣，只要該處的PH與氨基酸的PI不同，則氨基酸就會(huì)帶電，PH值PI時(shí)，aa帶-電；PH值PI時(shí)，aa帶+電。通電后，氨基酸就會(huì)移動(dòng)，直到某處的PH＝PI，氨基酸才呈電中性，不再移動(dòng)，因此，可以測出PI。

等電點(diǎn)沉淀

所有的氨基酸均為兩性物質(zhì)，亦即它們至少含有一個(gè)酸性基（carboxyl）及一個(gè)堿性基（α-amino）。這些可游離的團(tuán)基在pH變化時(shí)，因釋出或接受質(zhì)子而可充當(dāng)弱酸或弱堿，其離子化特性與其它物質(zhì)一樣遵守Henderson-Hasselbalch方程式：

pH

=

pKa

+

log10

[未質(zhì)子化的形式（堿）]

/

[已質(zhì)子化的形式（酸）]

即

pH

=

pKa

+

log

[A-]

/

[HA]

氨基酸可以三種形式存在，即正電荷（cation）、兩性離子（zwitterion）或雙極性離子（dipolar

ion）及負(fù)電荷（anion）等三種，若在酸性溶液中帶正電荷，則在堿性溶液中帶負(fù)電荷。若氨基酸在某一pH值下其凈電荷為0，且在電場中不移動(dòng)時(shí)，稱此pH值為它的pI值（等電點(diǎn)）。因?yàn)閮綦姾蔀榱?，凈電斥力不存在的緣故，大部份蛋白質(zhì)於等電點(diǎn)的pH值下，其溶解度最小。相反的，當(dāng)溶液的pH值低於或高於pI，所有蛋白質(zhì)分子所帶凈電荷必為同號(hào)，彼此之間有相斥力，不會(huì)凝結(jié)。所以，將pH調(diào)到等電點(diǎn)的大小，則大部份的蛋白質(zhì)將會(huì)沉淀，這種現(xiàn)象可以應(yīng)用於估算某蛋白質(zhì)的等電點(diǎn).