可以用紫外分光光度法對氨基酸，蛋白質(zhì)進行定量分析嗎

可以的

紫外分光光度法也是一種重要的檢測蛋白質(zhì)濃度的方法。

蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此，蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，其最大吸收峰位于280

nm附近（不同的蛋白質(zhì)吸收波長略有差別）。

如何用紙層析法對氨基酸進行定性和定量的測定

紙層析法（paper chromatography）是生物化學(xué)上分離、鑒定氨基酸混合物的常用技術(shù),可用于蛋白質(zhì)的氨基酸成分的定性鑒定和定量測定.紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法,其中濾紙纖維素上吸附的水是固定相,展層用的有機溶溶劑是流動相.在層析時,將樣品點在距濾紙一端約2～3cm的某一處,該點稱為原點；然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個方向進行展層,這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配,由于分配系數(shù)（Kd）不同,結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上.物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置可用比移值（rate of flow,Rf）來表示.所謂Rf,是指在紙層析中,從原點至氨基酸停留點（又稱為層析點）中心的距離（X）與原點至溶劑前沿的距離（Y）的比值：

在一定條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù).Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、溫度、濕度、層析濾紙的型號和質(zhì)量等因素有關(guān).

蛋白質(zhì)的定量分析和氨基酸的定量分析的區(qū)別

二者原理不同。

1， 紫外吸收：色，酪，苯丙等芳香族氨基酸所含的環(huán)狀結(jié)構(gòu)在280nm波長附近具有最大光吸收峰，而大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這些氨基酸殘基，所以測定蛋白質(zhì)溶液在紫外區(qū)280nm的光吸收值，可以定量測定溶液蛋白質(zhì)含量，是一種簡便快捷的方法。

2。茚三酮：氨基酸與茚三酮的水合物共同加熱，可生成藍紫色化合物，在570nm處有最大吸收峰。其顏色的深淺與氨基酸的氨量成正比，是氨基酸的定量分析方法。

測定氨基酸含量的方法有幾種

1)稱干重法.可用離心法或過濾法測定.優(yōu)點：可適用于一切微生物,缺點：無法區(qū)別死菌和活菌.

2)比濁法.原理：由于微生物在液體培養(yǎng)時,原生質(zhì)的增加導(dǎo)致混濁度的增加,可用分光光度計測定.優(yōu)點：比較準確.

3)測含氮量,大多數(shù)微生物的含氮量占干重的比例較一致,根據(jù)含氮量再乘以6.25即可測得其粗蛋白的含量.

4)血球計數(shù)板法.優(yōu)點：簡便、快速、直觀.缺點：結(jié)果包括死菌和活菌.

5)液體稀釋法.對未知菌樣作連續(xù)的10倍系列稀釋,經(jīng)培養(yǎng)后,記錄每個稀釋度出現(xiàn)生長的試管數(shù),然后查MPN表,再根據(jù)樣品的稀釋倍數(shù)就可計算其中的活菌含量.優(yōu)點：可計算活菌數(shù),較準確.缺點：比較繁瑣.

6)平板菌落計數(shù)法.取一定體積的稀釋菌液涂布在合適的固體培養(yǎng)基,經(jīng)培養(yǎng)后計算原菌液的含菌數(shù).優(yōu)點,可以獲得活菌的信息.缺點：操作繁瑣,需要培養(yǎng)一定時間才能獲得,測定結(jié)果受多種因素的影響.

氨基酸的檢測方法有哪些

1. 分光光度法氨基酸檢測：主要是利用氨基酸與衍生劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生藍紫色化合物，該化合物在某一波長處有最大吸收峰，根據(jù)吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。

2. 毛細管電泳法氨基酸檢測：根據(jù)分離原理的不同，可分為毛細管區(qū)帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電電泳、毛細管等速電泳以及膠束電動力學(xué)毛細管電泳。其中，毛細管區(qū)帶電泳和膠束電動力學(xué)毛細管電泳可用于氨基酸檢測。

3. 近紅外光譜法氨基酸檢測：利用有機化合物的含氫基團在特定波長區(qū)域躍遷，產(chǎn)生光譜的變化，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法間接地實現(xiàn)氨基酸的定量檢測。

4. 氣相色譜法氨基酸檢測：將氨基酸衍生化處理變?yōu)槿菀讱饣奈镔|(zhì)，根據(jù)氣態(tài)樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數(shù)的不同，實現(xiàn)對氨基酸的定量分析。

5. 高效液相色譜法氨基酸檢測：是最常用的一種氨基酸檢測方法。由于大多數(shù)氨基酸本身沒有紫外吸收和熒光反應(yīng)，因此需要對樣品進行衍生化處理將其轉(zhuǎn)化為有紫外吸收和發(fā)射熒光的物質(zhì)，衍生可分為柱前衍生和柱后衍生。

怎樣利用印三酮對氨基酸定量

1 茚三酮配制：稱0.6g茚三酮，加入15毫升正丙醇，溶解。再加入30毫升正丁醇，60毫升乙二醇，最后加入PH5。4的乙醇-乙酸鈉緩沖液9毫升，混勻，4攝氏度棕色試劑瓶保存，可保存十天。

2 PH5。4的乙醇-乙酸鈉緩沖液：54。4克乙酸鈉加入100毫升無氨蒸餾水，加熱至沸騰，使體積蒸發(fā)至60毫升左右。冷卻，加入30毫升冰醋酸，用無氨蒸餾水定容至100毫升。

3 氨基酸標液：稱80攝氏度烘干的亮氨酸46。8毫克，用10%異丙醇定容至100毫升，為1毫摩爾/升的標準氨基酸儲備液，冰箱保存。從中取5毫升，蒸餾水定容至50毫升，為5微克/毫升氨基酸標準液。

4 氰化鈉儲備液：稱取490毫克，溶于一升無氨蒸餾水，為0。01摩爾/升。

5 10%乙酸

6乙酸-氰酸鹽緩沖液：0。01摩爾/升氰化鈉20毫升，用乙醇-乙酸鈉緩沖液定容至一升。

7標線

管號 1 2 3 4 5 6

氨基液標液（毫升）0 0。2 0。4 0。6 0。8 1

無氨蒸餾水（毫升）2 1。8 1。6 1。4 1。2 1

茚三酮（毫升） 3 3 3 3 3 3

乙酸-氰酸鹽緩沖液 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5 0。5

每管游離氨基酸含量（微克）

0 1 2 3 4 5

加完試劑后，沸水中加熱15分鐘，取后后迅速冷卻，并不時搖動，呈現(xiàn)藍紫色時，用60%乙醇定容至20毫升。搖勻，570納米測定吸光度。

計算：

含量（微克/100克）=C*VT*100/（VS*W）

C：從標線上查得的含量 微克

VT：樣品總體積 毫升

VS：測定時取用的樣品體積 毫升

W：樣品鮮重 克

得到標準曲線再將待測氨基酸溶液進行上述反應(yīng)，根據(jù)吸光度值計算氨基酸含量