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氨基酸液質(zhì)分析 氨基酸 液相

氨基酸的分析的三組檢驗(yàn)方法?

1. 分光光度法氨基酸檢測(cè):主要是利用氨基酸與衍生劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物,該化合物在某一波長(zhǎng)處有最大吸收峰,根據(jù)吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。

2. 毛細(xì)管電泳法氨基酸檢測(cè):根據(jù)分離原理的不同,可分為毛細(xì)管區(qū)帶電泳、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管等電電泳、毛細(xì)管等速電泳以及膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳。其中,毛細(xì)管區(qū)帶電泳和膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳可用于氨基酸檢測(cè)。

3. 近紅外光譜法氨基酸檢測(cè):利用有機(jī)化合物的含氫基團(tuán)在特定波長(zhǎng)區(qū)域躍遷,產(chǎn)生光譜的變化,結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法間接地實(shí)現(xiàn)氨基酸的定量檢測(cè)。

4. 氣相色譜法氨基酸檢測(cè):將氨基酸衍生化處理變?yōu)槿菀讱饣奈镔|(zhì),根據(jù)氣態(tài)樣品中各組分在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)的不同,實(shí)現(xiàn)對(duì)氨基酸的定量分析。

5. 高效液相色譜法氨基酸檢測(cè):是最常用的一種氨基酸檢測(cè)方法。由于大多數(shù)氨基酸本身沒(méi)有紫外吸收和熒光反應(yīng),因此需要對(duì)樣品進(jìn)行衍生化處理將其轉(zhuǎn)化為有紫外吸收和發(fā)射熒光的物質(zhì),衍生可分為柱前衍生和柱后衍生。

氨基酸液質(zhì)分析 274是什么物質(zhì)

液質(zhì)流動(dòng)相選甲醇和水體系是因?yàn)閷?duì)于液相色譜而言,物質(zhì)的分離是基于被測(cè)物在流動(dòng)相和固定相間的分配比不同而獲得的,不管是不是中性物質(zhì),只要它們?cè)趦上嚅g的分配比不同就可以分離。而流動(dòng)相的改變也不過(guò)是為了獲取這個(gè)分配比的差異而已。

液質(zhì)流動(dòng)相的選擇方法:

1、流動(dòng)性主要看結(jié)構(gòu),極性大小,溶解性,對(duì)酸堿的敏感性等等。 大體上有機(jī)相是乙腈,甲醇,水相是甲酸水,乙酸水,甲醇水或者加點(diǎn)乙酸銨等。

2、再看化合物質(zhì)譜條件是(+),則水相可加甲酸,乙酸,一般0.1%,也可以0.2%,可以是條件,原則是能濃度低就不要濃度高,(-),不要用酸,會(huì)有抑制。

3、液相分離效果,可以用不同的有機(jī)相:水相比例,是分離效果好就可以。

4、觀察uv最佳吸收是多少?若離200nm很近,建議有機(jī)相用乙腈。

5、重要的是,水相不加任何物質(zhì)就可楚風(fēng)很好,建議不要加其他的。

6、液質(zhì)聯(lián)用所用的流動(dòng)相,不能用不揮發(fā)性的物質(zhì),如:磷酸鹽緩沖液等,常用甲酸鹽,乙酸鹽等易揮發(fā)的物質(zhì)用作緩沖鹽的首選。 在做液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定生物樣品時(shí),若選擇M H峰可在流動(dòng)相中加入一些添加劑提供H離子,如甲酸等,一般準(zhǔn)分子離子峰較穩(wěn)定。

7、液質(zhì)聯(lián)用的流動(dòng)相要求使用揮發(fā)性的酸堿鹽,常用的如下: 酸—甲酸、乙酸(<2.0%),三氟醋酸(≤0.5%) 堿—甲胺、乙胺、三乙胺(<1.0%) 鹽—醋酸銨(10-5mmol/L)。

氨基酸檢測(cè)?

你若是問(wèn)蛋白質(zhì),我可以直接告訴你又雙縮脲試劑(中學(xué)階段),但氨基酸的檢驗(yàn)比蛋白質(zhì)麻煩多了.一、氨基酸的分離和檢測(cè)氨基酸的分離和檢測(cè)手段,以往用化學(xué)分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動(dòng)分析儀.隨著高效液相色譜及填料的發(fā)展,HPLC在氨基酸檢測(cè)方面顯示了其特有的優(yōu)越性.但大多數(shù)氨基酸無(wú)紫外吸收和熒光發(fā)射特性,為提高分析檢測(cè)靈敏度和分離選擇特性,通常將氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法與柱后衍生法.HPLC與各種衍生相結(jié)合的氨基酸分析技術(shù),構(gòu)成了具有廣泛適用性的現(xiàn)代氨基酸分析技術(shù).x0d二、鑒定是哪種氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反應(yīng) (ninhydrin reaction) 茚三酮(弱酸環(huán)境加熱) 紫色(脯氨酸、羥脯氨酸為黃色) (檢驗(yàn)α-氨基)x0d2、坂口反應(yīng) (Sakaguchi reaction) 丙氨酸x0dα-萘酚+堿性次溴酸鈉 紅色 (檢驗(yàn)胍基 精氨酸有此反應(yīng))x0d3、米隆反應(yīng)(又稱米倫氏反應(yīng)) HgNO3+HNO3+熱 紅色 (檢驗(yàn)酚基 酪氨酸有此反應(yīng),未加熱則為白色)x0d4、Folin-Ciocalteau反應(yīng)(酚試劑反應(yīng)) 磷鎢酸-磷鉗酸 藍(lán)色 (檢驗(yàn)酚基 酪氨酸有此反應(yīng))x0d5、黃蛋白反應(yīng) 濃硝酸煮沸 黃色 (檢驗(yàn)苯環(huán) 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應(yīng))x0d6、Hopkin-Cole反應(yīng)(乙醛酸反應(yīng)) 加入乙醛酸混合后徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產(chǎn)生紫紅色環(huán) (檢驗(yàn)吲哚基 色氨酸有此反應(yīng))x0d7、Ehrlich反應(yīng) P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍(lán)色 (檢驗(yàn)吲哚基 色氨酸有此反應(yīng))x0d8、硝普鹽試驗(yàn) Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 (檢驗(yàn)巰基 半胱氨酸有此反應(yīng))

檢驗(yàn)氨基酸用什么方法?

1.茚三酮反應(yīng),氨基酸與其發(fā)生反應(yīng)縮合成藍(lán)色物質(zhì)。除開(kāi)脯氨酸和羥脯氨酸,他們與其反應(yīng)生成黃色衍生物。

2.桑格反應(yīng),氨基酸與其反應(yīng)會(huì)生成黃色的2,4-二硝基氨基酸,可以用于鑒定多肽或蛋白質(zhì)的N端氨基酸。

3.艾德曼反應(yīng)(DNFB反應(yīng)),即氨基酸與苯異硫氰酸反應(yīng)生成相應(yīng)的苯氨基硫甲酰氨基酸。

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