氨基酸的檢測方法有哪些

1. 分光光度法氨基酸檢測：主要是利用氨基酸與衍生劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，該化合物在某一波長處有最大吸收峰，根據(jù)吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。

2. 毛細(xì)管電泳法氨基酸檢測：根據(jù)分離原理的不同，可分為毛細(xì)管區(qū)帶電泳、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管等電電泳、毛細(xì)管等速電泳以及膠束電動力學(xué)毛細(xì)管電泳。其中，毛細(xì)管區(qū)帶電泳和膠束電動力學(xué)毛細(xì)管電泳可用于氨基酸檢測。

3. 近紅外光譜法氨基酸檢測：利用有機(jī)化合物的含氫基團(tuán)在特定波長區(qū)域躍遷，產(chǎn)生光譜的變化，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法間接地實(shí)現(xiàn)氨基酸的定量檢測。

4. 氣相色譜法氨基酸檢測：將氨基酸衍生化處理變?yōu)槿菀讱饣奈镔|(zhì)，根據(jù)氣態(tài)樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數(shù)的不同，實(shí)現(xiàn)對氨基酸的定量分析。

5. 高效液相色譜法氨基酸檢測：是最常用的一種氨基酸檢測方法。由于大多數(shù)氨基酸本身沒有紫外吸收和熒光反應(yīng)，因此需要對樣品進(jìn)行衍生化處理將其轉(zhuǎn)化為有紫外吸收和發(fā)射熒光的物質(zhì)，衍生可分為柱前衍生和柱后衍生。

氨基酸分析儀的優(yōu)缺點(diǎn)？

采用經(jīng)典的陽離子交換色譜分離、茚三酮柱后衍生法，對蛋白質(zhì)水解液及各種游離氨基酸的組分含量進(jìn)行分析。儀器基本結(jié)構(gòu)同普通hplc相似，但針對氨基酸分析進(jìn)行了細(xì)節(jié)優(yōu)化（例如氮?dú)獗Ｗo(hù)、惰性管路、在線脫氣、洗脫梯度及柱溫梯度控制等等）

通常細(xì)分為兩種系統(tǒng)：蛋白水解分析系統(tǒng)（鈉鹽系統(tǒng)）和游離氨基酸分析系統(tǒng)（鋰鹽系統(tǒng)），利用不同濃度和ph值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰進(jìn)行梯度洗脫。其中鈉鹽系統(tǒng)一次最多分析約25種氨基酸，速度較快，基線平直度好；鋰鹽系統(tǒng)一次最多分析約50種氨基酸，速度較慢，基線一般不如鈉鹽系統(tǒng)好。

分析效果：從目前已知的氨基酸分析方法比較來看，除靈敏度（即最低檢測限）比hplc柱前衍生方法稍低以外（hplc：0.5pmol；氨基酸分析儀：10pmol)，其他如分離度、重現(xiàn)性、操作簡便性、運(yùn)行成本等方面，都優(yōu)于其他分析方法。

氨基酸分析在各個(gè)領(lǐng)域的重要應(yīng)用是什么？

樓主你好： 由于近年來化學(xué)領(lǐng)域的快速發(fā)展氨基酸分析在生物化學(xué)、藥學(xué)和臨床研究上都有著廣泛而重要的應(yīng)用. 氨基酸的分離,尤其 是氨基酸對映體的分離一直是海內(nèi)外的研究熱門.在手性分離這一領(lǐng)域,高效液相色譜法（HPLC）一直 是最廣泛使用的方法. 目前高效液相色譜分離手性化合物主要有兩種方法:一種是直接分離法,也就是利用手 性固定相直接分離手性化合物對映體. 王亞麗[1 ] 等曾用纖維素-三（ 3 , 5-二甲基苯基氨基甲酸酯） （CDMPC） 手性柱在正相模式下拆分了3 種外消旋氨基酸的衍生物. 另一種是間接分離法,目前主要是 柱前衍生化法———將手性化合物柱前衍生化,將對映體轉(zhuǎn)化為非對映體,進(jìn)而使用常規(guī)柱完成分離分析. 離多種氨基酸的對映體,將化學(xué)計(jì)量學(xué)方法引入絲氨酸對映體重疊峰的分析,可以一次性地定量分析多種氨基酸對映體.所用衍生劑為鄰苯二甲醛（OPA） 和N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC） [2 ,3 ] . NAC是一種手性硫醇,其它手性硫醇如N-乙酰-D-青霉胺（NAP） 、N-異丁酰-L-半胱氨酸（ IBLC） 、N-異丁酰-D-半胱氨酸（IBDC） [4 ] 也可與OPA 一起做為衍生劑. 1. 1 試劑與儀器 DL-絲氨酸（上海麗珠春風(fēng)生物技術(shù)有限公司） ;L-絲氨酸、β丙氨酸、DL-丙氨酸、L-丙氨酸、DL-苯丙 氨酸、L-苯丙氨酸、DL-纈氨酸、L-纈氨酸、硼酸、氯化鉀、氫氧化鈉、乙酸鈉（中國醫(yī)藥團(tuán)體上?；瘜W(xué)試劑公司）;鄰苯二甲醛（以下簡稱OPA ,中國醫(yī)藥團(tuán)體上海化學(xué)試劑公司） ;N-乙酰-L-半胱氨酸（以下簡稱 NAC ,Lancaster 公司） ;甲醇（HPLC 級,Merck 公司） ;高純水. 除甲醇和水外其他試劑均為分析純. 美國Aglient HP1100 高效液相色譜儀（DAD 檢測器） ,ChemStation 化學(xué)工作站. 美國Aglient8453 UV – Vis 光譜儀. 1. 2 樣品預(yù)處理[5 ] 各氨基酸樣品配制成濃度約為0. 01 M 的水溶液.硼酸緩沖液的配制:硼酸（0. 01 M） 、氫氧化鈉 （0. 01 M） 和水按體積比50∶45∶5 配制得到pH 為9. 3的硼酸緩沖液.衍生劑的配制:將53. 3 mg OPA溶于50 mL 甲醇得到OPA 甲醇溶液. NAC 溶于硼酸緩沖液中（0. 00286 M） . 取12 mL OPA 甲醇溶液、10mL NAC 硼酸溶液,添加3 mL 硼酸緩沖液至25 mL ,得到OPAPNAC 衍生劑. 1. 3 衍生反應(yīng) 將0. 1 mL 氨基酸與5 mL OPAPNAC 衍生劑徹底混合5 min 后過濾進(jìn)樣分析. 1. 4 色譜前提 ZORBAX Eclipse XDB – C8 色譜柱（4. 6 mm 3 150mm , 5μm） . 不同比例的甲醇和0.05 M醋酸鈉水溶 液為活動相,流速1 mLmin – 1 ,進(jìn)樣量20μL. 所有的色譜分離均在室溫下進(jìn)行, 在線檢測波長為334 nm ,DAD 檢測波長范圍為190～400 nm. 非負(fù)矩陣因子分解（NMF） 計(jì)算截取的數(shù)據(jù)波長范圍為320 nm～390nm. 1. 5 數(shù)據(jù)處理方法 本實(shí)驗(yàn)采用非負(fù)矩陣因子分解（NMF） [6 ] 計(jì)算兩個(gè)混合組分的純譜. 非負(fù)矩陣因子分解是在“非負(fù)” 限制約束前提下的一種矩陣分解新方法,它的基本思路是將非負(fù)矩陣V 分解成兩個(gè)非負(fù)因子矩陣W 和H.NMF 算法中采用了乘法更新公式（見公式（1）和（2） ） ,所以不必采用其它限制前提即能保證分解 結(jié)果“非負(fù)”. 2. 1 氨基酸對映體的分離 氨基酸與衍生劑的反應(yīng)天生異吲哚類產(chǎn)物[7 ] ,反應(yīng)方程式見圖1. 由紫外丈量得到的圖譜可看出, 此類衍出產(chǎn)物在230 nm 和334 nm 處各有一個(gè)最大吸收 . 但因?yàn)?30 nm 處較易受干擾,故在色譜實(shí)驗(yàn)中除了記實(shí)全波長數(shù)據(jù)外,選擇334 nm 作為檢測波長. 下文中所提到的氨基酸色譜峰均為其經(jīng)由上述衍生化后所得到的衍生物的色譜峰. 結(jié)果表明,在甲醇∶醋酸鈉溶液為30∶70 的淋洗前提下,除DL-絲氨酸的兩種對映體有部門重 疊外,DL-丙氨酸、DL-纈氨酸和DL-苯丙氨酸的對映體能得到基線分離,但是DL-纈氨酸的兩種對映體出峰時(shí)間為17 min 和25 min ,DL-苯丙氨酸的兩種對映體出峰時(shí)間為38 min 和43 min.此分離前提下,不僅鋪張活動相,而且峰形不理想. 假如將活動相的比例調(diào)節(jié)至45∶55 ,固然可使DL-纈氨酸和DL-苯丙氨酸的對映體在10 min 內(nèi)洗脫出峰,但將使DL-絲氨酸及DL-丙氨酸完全或部門重疊. 更多質(zhì)量檢測、分析測試、化學(xué)計(jì)量、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)技術(shù)資料請參考中檢所標(biāo)準(zhǔn)品對照品 考慮到DL-纈氨酸和DL-苯丙氨酸留存過強(qiáng)的情況,操縱中采用了簡樸的梯度淋洗,在前三種氨基酸全部出峰后,改變活動相配比使DL-纈氨酸和DL-苯丙氨酸快速出峰. 淋洗方案如下:在0～6 min 內(nèi)保持甲醇∶醋酸鈉溶液為30∶70 不變,在6～7 min 由此比例線性變化至45∶55 ,在7 min 以后保持45∶55不變. 各對對映體的定性采用左旋光學(xué)純標(biāo)樣通過內(nèi)標(biāo)法確定.β丙氨酸沒有手性,沒有對映異構(gòu)體,只有一個(gè)色譜峰. 2. 2 波譜解析法的使用 盡管采用梯度洗脫,此譜中仍有一對重疊峰—絲氨酸的兩個(gè)對映體. 在這種情況下, 假如要定量分析此體系,知道兩組分的實(shí)際峰面積是必須的. 我們使用非負(fù)矩陣因子分析解析出兩組分的純譜 ,但此結(jié)果與實(shí)際純譜還存在一個(gè)系數(shù)關(guān)系,即AXD-Ser BXL-Ser = YDL-Ser .為得到兩組分實(shí)際的純譜,我們用最小二乘回歸（ least squaresregress , LSR） 來計(jì)算系數(shù)A 和B,得到的結(jié)果如下 : A = 72. 59 ; B = 75. 98. 此系數(shù)乘以各自組分的純譜即為兩組分的實(shí)際峰面積. 2. 3. 1 尺度曲線的建立 采用單一對映體標(biāo)樣在不同濃度值下的色譜峰面積或峰高建立尺度曲線. 實(shí)驗(yàn)中選用L-丙氨酸和L-苯丙氨酸作為兩種標(biāo)樣,L-丙氨酸對應(yīng)甲醇∶醋酸鈉= 30∶70 的色譜前提,L- 苯丙氨酸對應(yīng)甲醇∶醋酸鈉= 45∶55 的色譜前提. 以濃度對峰面積或峰高進(jìn)行線性擬和,得到尺度曲線方程 . 通過此方程可以測定混合樣品中兩個(gè)標(biāo)樣組分的濃度. 2. 3. 2 其它組分相對濃度預(yù)告 在同樣的色譜前提下,體系中各組分的含量比與其色譜峰面積比成線性關(guān)系. 各組分的峰面積和所占面積面分比結(jié)果見表1 ,其中D-絲氨酸和L-絲氨酸的單峰面積是根據(jù)上述化學(xué)計(jì)量學(xué)方法計(jì)算而得.

列舉三種氨基酸的定量分析方法，說明其工作原理。

就給你找到兩種，將就著看吧..你找到了另一種，再告訴我一下

1、化學(xué)分析法——甲醛滴定法

甲醛滴定法用于氨基氮的測定, 可以測出樣品中總氨基酸的含量,其原理是在中性或弱堿性水溶液中,氨基酸的α—氨基與醛類反應(yīng)生Schiff堿:α—氨基酸與甲醛反應(yīng)生成亞甲基亞氨基衍生物

2、分光光度法——茚三酮法

茚三酮是一種能使氨基酸生成在可見光區(qū)有吸收的衍生試劑。該方法的基本原理是經(jīng)陽離子交換柱分離出的氨基酸與茚三酮混合,經(jīng)加熱反應(yīng)后,一級胺與之生成藍(lán)紫色化合物,二級胺與之生成黃色化合物。兩種衍生物使用雙通道紫外檢測器同步檢測,檢測波長分別為570nm 和436nm。

氨基酸的分析的三組檢驗(yàn)方法？

1. 分光光度法氨基酸檢測：主要是利用氨基酸與衍生劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，該化合物在某一波長處有最大吸收峰，根據(jù)吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。

2. 毛細(xì)管電泳法氨基酸檢測：根據(jù)分離原理的不同，可分為毛細(xì)管區(qū)帶電泳、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管等電電泳、毛細(xì)管等速電泳以及膠束電動力學(xué)毛細(xì)管電泳。其中，毛細(xì)管區(qū)帶電泳和膠束電動力學(xué)毛細(xì)管電泳可用于氨基酸檢測。

3. 近紅外光譜法氨基酸檢測：利用有機(jī)化合物的含氫基團(tuán)在特定波長區(qū)域躍遷，產(chǎn)生光譜的變化，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法間接地實(shí)現(xiàn)氨基酸的定量檢測。

4. 氣相色譜法氨基酸檢測：將氨基酸衍生化處理變?yōu)槿菀讱饣奈镔|(zhì)，根據(jù)氣態(tài)樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數(shù)的不同，實(shí)現(xiàn)對氨基酸的定量分析。

5. 高效液相色譜法氨基酸檢測：是最常用的一種氨基酸檢測方法。由于大多數(shù)氨基酸本身沒有紫外吸收和熒光反應(yīng)，因此需要對樣品進(jìn)行衍生化處理將其轉(zhuǎn)化為有紫外吸收和發(fā)射熒光的物質(zhì)，衍生可分為柱前衍生和柱后衍生。

氨基酸成分分析是什么？

氨基酸含有氨基和羧基兩種成分。與羥基酸類似，氨基酸可按照氨基連在碳鏈上的不同位置而分為α－，β－，γ－…w-氨基酸，但經(jīng)蛋白質(zhì)水解后得到的氨基酸都是α－氨基酸，而且僅有二十幾種，他們是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位。

氨基酸為構(gòu)成動物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。含有堿性氨基和酸性羧基的有機(jī)化合物。氨基連在α－碳上的為α－氨基酸。組成蛋白質(zhì)的氨基酸大部分為α－氨基酸。

物理性質(zhì)

氨基酸為無色晶體，熔點(diǎn)超過200℃，比一般有機(jī)化合物的熔點(diǎn)高很多。α－氨基酸有酸、甜、苦、鮮4種不同味感。谷氨酸單鈉和甘氨酸是用量最大的鮮味調(diào)味料。氨基酸一般易溶于水、酸溶液和堿溶液中，不溶或微溶于乙醇或乙醚等有機(jī)溶劑。

氨基酸在水中的溶解度差別很大，例如酪氨酸的溶解度最小，25℃時(shí)，100g水中酪氨酸僅溶解0.045g，但在熱水中酪氨酸的溶解度較大。賴氨酸和精氨酸常以鹽酸鹽的形式存在，因?yàn)樗鼈儤O易溶于水，因潮解而難以制得結(jié)晶。