請(qǐng)問分子病理學(xué)的地位和應(yīng)用？

地位：分子生物學(xué)的發(fā)展, 是人們對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路作用機(jī)制研究的不斷深入，繼而為其特異性靶點(diǎn)而設(shè)計(jì)的分子靶向藥物的開發(fā),使腫瘤治療已經(jīng)進(jìn)入了一個(gè)全新的時(shí)代。同時(shí)也為病理學(xué)提出了新的挑戰(zhàn)，并注入了新的活力。病理學(xué)不再局限于組織和細(xì)胞水平的診斷，而開拓了分子病理學(xué)的新領(lǐng)域：不僅為尋找新的分子靶點(diǎn)提供線索，還可以通過基因檢測(cè)為分子靶向治療提供依據(jù)，從而使靶向治療做到更有的放矢。目前有應(yīng)用前景的靶點(diǎn)包括蛋白激酶、腫瘤血管生成、細(xì)胞周期調(diào)控等方面，這其中尤以針對(duì)突變激酶靶點(diǎn)的治療取得的進(jìn)展喜人。

分子病理學(xué)的應(yīng)用

一、伊馬替尼治療胃腸道間質(zhì)瘤（Gastrointestinal Stromal Tumors GIST）與c-kit、PDGFRA基因檢測(cè)

Imatinib mesylate（伊馬替尼，過去稱STI157，商品名Glivec 或Gleevec）治療GIST是近年來一個(gè)成功的分子靶向治療模型，而有關(guān)GIST以基因型為基礎(chǔ)的治療還有許多問題有待解決。深入研究GIST的分子病理機(jī)制可以為完善其分子靶向治療方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為其它腫瘤特異靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)提供線索。

1.伊馬替尼用于治療GIST的分子基礎(chǔ)

2001年伊馬替尼的出現(xiàn)標(biāo)志著針對(duì)腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抗腫瘤戰(zhàn)略取得了令人矚目的突破。伊馬替尼是一種酪氨酸蛋白激酶抑制劑，是第一個(gè)基于對(duì)腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的認(rèn)識(shí)而開發(fā)的抗癌藥物，在原癌基因性的酪氨酸激酶和伊馬替尼之間的基因型與藥物的反應(yīng)關(guān)系對(duì)于研發(fā)其它腫瘤的靶向信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑提供了一個(gè)有意義的模型[1]。最初伊馬替尼的研發(fā)是作為血小板衍生生長(zhǎng)因子受體 (PDGFR)的特異性抑制劑，而后發(fā)現(xiàn)其能選擇性地抑制Bcr-Abl蛋白激酶從而抑制白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)及腫瘤的形成，且不影響對(duì)正常細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖起作用的激酶，對(duì)治療Bcr-Abl 陽性的慢性粒細(xì)胞性白血病有較好療效。Buchdunger等人后來發(fā)現(xiàn)伊馬替尼還能阻斷酪氨酸蛋白激酶受體KIT的功能，使人們把它與GIST聯(lián)系起來。GIST對(duì)傳統(tǒng)的化療和放療無效，臨床試驗(yàn)證實(shí)伊馬替尼對(duì)難切性和/或轉(zhuǎn)移性GIST非常有效，目前已經(jīng)用于晚期不能切除的GIST，而且開始應(yīng)用于術(shù)后的高復(fù)發(fā)危險(xiǎn)的患者的輔助治療。我國(guó)自2001年亦開始應(yīng)用伊馬替尼治療GIST，并獲得相當(dāng)效果。

GIST是胃腸道最常見的間葉性腫瘤，每年發(fā)生在美國(guó)至少為2000～5000例，在中國(guó)，發(fā)生率也有逐年上升的趨勢(shì)。GIST可發(fā)生于胃腸道的任何部位，以胃和小腸最為多見，少部分發(fā)生于網(wǎng)膜、腹腔等。近年研究發(fā)現(xiàn)GIST與胃腸的間質(zhì)Cajal細(xì)胞 (ICC) 在形態(tài)和免疫表型以及超微結(jié)構(gòu)上具有相似性，都具有表達(dá)KIT蛋白的特征，提示GIST可能起源于向ICC分化的干細(xì)胞。由于目前普遍認(rèn)為GIST沒有絕對(duì)的良性，尚未發(fā)現(xiàn)可以特異性預(yù)測(cè)惡性轉(zhuǎn)變的指標(biāo)。依據(jù)Fletcher 2000年提出的GIST生物學(xué)行為分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)可分為極低度、低度、中度和高度侵襲危險(xiǎn)性，最終惡性的判斷取決于腫瘤的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。這就為從分子病理學(xué)角度上重新認(rèn)識(shí)GIST提出了迫切的任務(wù)。

由原癌基因c-kit編碼的KIT蛋白屬于III型酪氨酸蛋白激酶跨膜受體（RTK），由胞內(nèi)的酪氨酸激酶區(qū)、跨膜區(qū)和帶有配體結(jié)合位點(diǎn)的胞外區(qū)構(gòu)成。在與其配體干細(xì)胞因子（SCF）結(jié)合后發(fā)生二聚體化，激活自身酪氨酸蛋白激酶活性，使受體殘基發(fā)生磷酸化，引起胞漿內(nèi)具有SH2功能域的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白與受體結(jié)合，進(jìn)而激活下游的信號(hào)傳導(dǎo)通路，如Ras/Raf/MEK/MAPK通路，PLC?/DAG/IP3通路，PI-3K/AKT通路，JAK/STAT通路等，引起一系列的細(xì)胞變化，在包括增殖、粘附、凋亡和分化的腫瘤發(fā)生過程中調(diào)控細(xì)胞功能[2]。因此KIT原癌蛋白的表達(dá)是GIST發(fā)生的核心事件，也是目前普遍認(rèn)可的確定GIST的特異敏感標(biāo)準(zhǔn) (CD117陽性)。闡明KIT信號(hào)通路對(duì)臨床同樣具有重要意義。因?yàn)镚IST病人可能最終對(duì)KIT抑制療法耐藥，因此人們正在努力研究發(fā)現(xiàn)下游信號(hào)中重要的蛋白分子以作為對(duì)KIT抑制療法耐藥的新靶點(diǎn)。

2．c-kit基因檢測(cè)對(duì)伊馬替尼治療GIST的意義

1998年報(bào)道GIST中存在c-kit的基因突變，使其在無配體結(jié)合的情況下，KIT蛋白仍然能保持持續(xù)的自身酪氨酸蛋白激酶活性，從而激活下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。目前認(rèn)為kit的這種獲得功能性的突變是GIST發(fā)生的重要機(jī)制。其中在kit基因編碼近跨膜結(jié)構(gòu)域的11號(hào)外顯子中的突變最為常見，占50%～92%，此外在胞外結(jié)構(gòu)域的9號(hào)外顯子、激酶結(jié)構(gòu)域的13號(hào)外顯子和磷酸轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域的17號(hào)外顯子的突變分別占8～13%、0～4%和0～4%。其中11號(hào)外顯子的突變形式多樣，包括框內(nèi)缺失突變、點(diǎn)突變和框內(nèi)串聯(lián)重復(fù)（Identical Tandem Duplication ITD）插入突變。國(guó)內(nèi)有關(guān)GIST分子檢測(cè)的報(bào)道還很少，多集中在11號(hào)外顯子突變，且樣本量較小，突變率低，為30.8%（14/52）和41.5％（34/82），而未見9、13、17號(hào)外顯子突變的報(bào)道。我們的60例GIST小樣本研究顯示其中38例（63.3％）檢測(cè)到kit突變，均為CD117陽性：其中35例（58.3％）為11號(hào)外顯子突變，2例（3.3％）為9號(hào)外顯子突變，僅1例（1.7％）13號(hào)外顯子突變，未檢測(cè)到17號(hào)外顯子的突變[3]。進(jìn)一步擴(kuò)大樣本100例GIST中68％檢測(cè)到kit突變(未發(fā)表)。似乎9號(hào)外顯子在我國(guó)GIST的突變率明顯低于國(guó)外，因?yàn)橛醒芯恐赋?號(hào)外顯子屬于較特殊的一種突變亞型，往往發(fā)生在胃外，生物學(xué)行為屬高度侵襲危險(xiǎn)性。我國(guó)的這種（原診斷為惡性）GIST比例明顯高于國(guó)外，且發(fā)生在胃外的并不少見，國(guó)人GIST是否有不同的基因突變位點(diǎn)譜，需要進(jìn)行大樣本研究。近來不少研究試圖將突變比例與組織學(xué)特征和臨床行為相聯(lián)系，早期有一些報(bào)道進(jìn)展期或高度侵襲危險(xiǎn)性的GIST中突變多見，但目前多數(shù)報(bào)道提示基因突變情況與進(jìn)展性行為有關(guān)的腫瘤大小、分裂相或分期等因素之間無明顯相關(guān)性。國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)均為高度侵襲危險(xiǎn)性者突變常見，而我們的初步結(jié)果顯示即使是因其它疾病偶然發(fā)現(xiàn)的直徑小于1厘米的GIST中也有相當(dāng)比例攜帶11號(hào)外顯子突變，同Antonescu CR的結(jié)果一致。因此需要大樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，找尋我國(guó)GIST基因型與病理、臨床特點(diǎn)間的規(guī)律，并進(jìn)一步明確kit突變?cè)贕IST發(fā)生中的作用。

kit突變本身是否與病人的預(yù)后相關(guān)，目前尚無定論。有研究表明kit突變是一個(gè)生存的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)，即有突變者的5年生存率要低于無突變者。且有研究指出具11號(hào)外顯子的點(diǎn)突變者較缺失和插入突變者生存率高。

伊馬替尼的應(yīng)用可明顯改善病人的預(yù)后。已有資料證實(shí)kit突變的位置能影響GIST對(duì)伊馬替尼的反應(yīng)。一些體外和臨床研究已表明突變?cè)诩っ肝稽c(diǎn)的病例對(duì)抑制劑并不有效，如與肥大細(xì)胞增生癥相關(guān)的激酶區(qū)D816V突變。幸好大多數(shù)kit突變都位于調(diào)控區(qū)即非酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，這就使抑制劑能有效地封閉酶位點(diǎn)。并且11號(hào)外顯子有突變者與沒有突變者和9號(hào)外顯子突變者相比，對(duì)伊馬替尼的部分緩解率（partial response rate）明顯提高，平均生存期延長(zhǎng)，病情進(jìn)展緩慢[4～5]。

同時(shí)亦有研究提示伊馬替尼可以通過促進(jìn)NK細(xì)胞活性等其他途徑來起到和增強(qiáng)其抗腫瘤作用。即使是KIT低表達(dá)的GIST, 伊馬替尼亦具有一定的治療作用。

因此檢測(cè)病人手術(shù)標(biāo)本中c-kit基因突變的情況對(duì)判斷伊馬替尼應(yīng)用的預(yù)后有重要意義。

3．PDGFRA基因檢測(cè)與GIST

對(duì)于缺乏 kit 突變的GIST的發(fā)生，近年來日益受到研究者的關(guān)注。由于發(fā)現(xiàn)即使是在包含野生型 kit 的GIST中KIT 也活化，就把人們的目光引向KIT 相關(guān)的受體酪氨酸激酶（RTK）。這一類RTK包括前原癌基因FMS，其編碼巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (M-CSF1) 的受體；兩個(gè)PDGFR基因：包括PDGFRA和PDGFRB；FLT1與FMS相關(guān)的一個(gè)前原癌基因。其中PDGFRA 基因和 kit 基因位于人4號(hào)染色體的相鄰位置上，兩者的氨基酸序列有很高的同源性。近來國(guó)外報(bào)道在28%～67% 無kit突變的GIST中檢出了 PDGFRA 的突變，并且 PDGFRA 突變與 kit 突變是相互獨(dú)立的。因此目前認(rèn)為獲得功能性的 PDGFRA 突變很可能是 GIST 的另一個(gè)病因。一方面PDGFRA的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與kit 相似，功能性的 PDGFRA 突變可以轉(zhuǎn)化小腸的 Cajal 細(xì)胞；另一方面PDGFRA的功能性突變?cè)?93T 細(xì)胞中能與野生型的 kit 結(jié)合并使之活化。這一發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)了III型RTK的激活在促進(jìn)GIST發(fā)生中的核心作用。國(guó)內(nèi)尚無有關(guān)PDGFRA突變的報(bào)道。我們?cè)?0例中的3例檢出了PDGFRA突變（5％），占無KIT表達(dá)病例的50％，全部為 18號(hào)外顯子（活化環(huán)結(jié)構(gòu)域）的點(diǎn)突變D842V，為最常見的突變形式。未檢測(cè)到12號(hào)外顯子（近膜結(jié)構(gòu)域）的突變。與Medeiros等人的報(bào)道相似，此類突變多見于發(fā)生在網(wǎng)膜/腸系膜的惡性病例。而最近Lasota J的較大量病例研究表明PDGFRA突變主要發(fā)生在胃部，且大多生物學(xué)行為呈“良性”經(jīng)過[6]。因此我國(guó)PDGFRA突變的突變情況還需擴(kuò)大病例數(shù)進(jìn)行研究。

目前證實(shí)PDGFRA 18號(hào)外顯子突變對(duì)抑制劑療效不明顯，但仍有30％PDGFRA 突變的病例對(duì)伊馬替尼敏感的報(bào)道提示我們應(yīng)重視KIT陰性GIST的診斷問題以及應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)基因突變檢測(cè)判斷能否適用于伊馬替尼治療。

由此是否可能將GIST按照分子水平上的改變分成至少三種類型，即kit 突變型、PDGFRA突變型和無突變型。因此GIST可以看作是在大多數(shù)情況下由單獨(dú)的分子機(jī)制所驅(qū)動(dòng)的腫瘤。而絕大多數(shù)人類的癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，如能按照具有明確的分子改變分類，就有可能針對(duì)每一類型實(shí)施以特定分子為基礎(chǔ)的治療。由于絕大多數(shù)GIST有KIT的高表達(dá)，即使是在不具有基因突變的病例中，因此這部分GIST的發(fā)生源于何種啟動(dòng)因素，目前尚無相關(guān)研究。Kit突變是GIST發(fā)生的早期事件，且具有突變的“良性”GIST 大多數(shù)并不進(jìn)展為“惡性”，這表明kit突變本身并不能引起GIST的惡性轉(zhuǎn)化。而導(dǎo)致GIST惡性轉(zhuǎn)化的因素目前還未知。

4．c-kit基因、PDGFRA基因檢測(cè)與伊馬替尼治療GIST耐藥

盡管伊馬替尼在治療GIST上取得了令人鼓舞的成績(jī)，卻不可避免的出現(xiàn)了耐藥的問題。初步的研究表明耐藥包括KIT依賴性或KIT非依賴性機(jī)制。多數(shù)病例的耐藥可能還是源于KIT的再活化。這其中部分病例是因?yàn)楂@得了存在于或者接近藥物－蛋白相互作用位點(diǎn)的突變或是能導(dǎo)致蛋白構(gòu)象發(fā)生改變而使KIT與伊馬替尼親和力降低的突變，削弱了藥物的效能。最近Chen LL等人報(bào)道了5例具有對(duì)伊馬替尼敏感的外顯子9或11突變的GIST病人在用藥過程中發(fā)生了耐藥，獲得一種新的點(diǎn)突變-V654V，位于kit酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域[7]。這一耐藥很可能是由于KIT蛋白構(gòu)象改變所致。

有意思的是最近Debiec-Rychter報(bào)道了一個(gè)新機(jī)制：一例病人由kit-G565R突變通過PDGFRA次級(jí)突變D842V而對(duì)伊馬替尼產(chǎn)生耐藥[8]。這一現(xiàn)象表明對(duì)伊馬替尼耐藥可以通過另一個(gè)激酶的突變（如PDGFRA）而實(shí)現(xiàn)。部分病例對(duì)伊馬替尼的不敏感可能與c-kit或PDGFRA基因擴(kuò)增有關(guān)。因此對(duì)于GIST病人不主張使用傳統(tǒng)化療，可能會(huì)促進(jìn)與疾病演進(jìn)相關(guān)的克隆分化進(jìn)展，產(chǎn)生影響藥物反應(yīng)的基因改變。KIT非依賴性機(jī)制耐藥的提出是基于發(fā)現(xiàn)有病例徹底失去了KIT的表達(dá)。通過間期FISH證實(shí)標(biāo)記的kit/PDGFRA基因在等位基因上丟失。同時(shí)他們還通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對(duì)伊馬替尼耐藥的幾種突變對(duì)PKC412，另一種KIT和PDGFR的抑制劑， 反應(yīng)敏感。這為尋找伊馬替尼耐藥的替代品提供了有意義的線索。部分病例發(fā)生耐藥的原因還不得而知，還有很多問題需要進(jìn)一步研究。

綜上，深入研究GIST發(fā)生、發(fā)展及治療有效、耐藥的分子機(jī)制可以為生物靶向治療提供依據(jù)和新的靶點(diǎn)。

二、 Herceptin治療乳腺癌與HER2/ neu (cerbB2 )基因過表達(dá)的檢測(cè)

1．Herceptin治療乳腺癌的分子基礎(chǔ)

HER2/ neu 是EGFR（表皮生長(zhǎng)因子受體）家族的一員，此家族在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，是細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及存活的重要調(diào)節(jié)者。通常情況下，HER2/ neu 只在胎兒期表達(dá)。到成年后，只在極少數(shù)組織內(nèi)有低表達(dá)。而HER2/ neu正?；虍a(chǎn)物的過度表達(dá)，已證實(shí)在卵巢癌、肺腺癌、原發(fā)性腎細(xì)胞癌等，尤其是乳腺癌的惡性轉(zhuǎn)化上起了關(guān)鍵性的作用，并且是預(yù)后不良的指征。

由于HER2/ neu 的過表達(dá)與腫瘤發(fā)生密切相關(guān),人們找到了一種抗HER2/ neu 的抗體來下調(diào)其表達(dá),命名為Trastuzumab ( Herceptin) 。其通過直接和間接兩種機(jī)制影響腫瘤生長(zhǎng)：直接機(jī)制是抗體與HER2/ neu 結(jié)合改變了受體的信號(hào)傳導(dǎo)功能。間接機(jī)制是抗體通過ADCC 和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用殺傷腫瘤細(xì)胞，還可誘導(dǎo)細(xì)胞分化,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。目前已成功應(yīng)用于治療HER2/ neu基因擴(kuò)增或過度表達(dá)伴或不伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者。Herceptin無論單用還是聯(lián)合化療，無論作為一線還是二線選擇，都是一個(gè)治療乳腺癌轉(zhuǎn)移的重要選擇藥物。由于其毒副反應(yīng)小，患者耐受性好，已成為靶向性治療的成功范例。

2．HER2/ neu基因過表達(dá)的檢測(cè)方法

如何準(zhǔn)確、方便地檢測(cè)出HER2/ neu基因過表達(dá)的乳腺癌病例，為運(yùn)用Herceptin 治療提供依據(jù)以及判斷預(yù)后，就成為病理工作者不斷研究的課題。

目前最常用的方法有ELISA、FISH（原位雜交免疫熒光）及IHC（免疫組化）法。ELISA法主要用于檢測(cè)乳腺癌患者血清或新鮮組織中的p185 總蛋白。此方法敏感、 簡(jiǎn)單、安全且費(fèi)用低，但僅適用于新鮮標(biāo)本，不適用石蠟包埋組織。FISH法用于檢查分裂期細(xì)胞的核型、識(shí)別染色體數(shù)目、確定腫瘤細(xì)胞的來源。此方法特異性高且穩(wěn)定、敏感，能直接觀察HER2/ neu基因的擴(kuò)增量。 缺點(diǎn)主要是價(jià)格較貴，難以普及。IHC法因操作簡(jiǎn)便，目前被廣泛應(yīng)用。但假陰性較高，且對(duì)陽性信號(hào)程度的判讀上主觀因素影響較大。我們正在試驗(yàn)用real-time PCR（實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)）來檢測(cè)HER2/ neu基因過表達(dá)。這項(xiàng)方法是分析mRNA擴(kuò)增的水平，基于實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR 擴(kuò)增的產(chǎn)物,不需要一般的PCR 的產(chǎn)物處理,因而避免了因?yàn)椴僮魉a(chǎn)生的各種問題[9]。能夠動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR 過程,具有定量性和實(shí)用性。需要特別強(qiáng)調(diào)的是只有對(duì)上述檢測(cè)方法進(jìn)行統(tǒng)一規(guī)范化，才能提供準(zhǔn)確的HER2/ neu基因狀態(tài)，為治療提供可靠的依據(jù)。

3. 其他

除了上述兩種成功應(yīng)用的藥物外，還有許多分子靶向藥物也顯示出很好的應(yīng)用前景。如部分肺癌病例，對(duì)EGFR抑制劑治療有效，與其EGFR激酶結(jié)構(gòu)域的突變有關(guān)。 近來抑制腫瘤介導(dǎo)的血管生成為腫瘤治療提供了非細(xì)胞毒性的新途徑。A vastin(Bevacizum ab, rhuMAb－VEGF) 是第一個(gè)人重組的抗VEGF 單抗, 能夠結(jié)合并阻斷VEGF (血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子) 的作用, 從而發(fā)揮抗腫瘤活性。其療效除了與間質(zhì)血管形成模式有關(guān)外，還與腫瘤表達(dá)VEGF的水平相關(guān)[10]。

可以預(yù)想，在今后對(duì)于腫瘤分子靶向治療的研究和運(yùn)用中，分子病理學(xué)必將起到更大的作用，同時(shí)，也促進(jìn)其與臨床緊密結(jié)合，向更具實(shí)用性發(fā)展。

merck millipore的ni-nta buffer kit怎么樣

蛋白過鎳柱純化的原理：Ni柱中的氯化鎳或者硫酸鎳可以與有HIs（組蛋白）標(biāo)簽的堿性蛋白蛋白結(jié)合，組蛋白標(biāo)簽一般是6個(gè)組氨酸（堿性氨基酸）。

在蛋白上樣后，帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白特異性結(jié)合到柱子里，其他的雜蛋白流出。

Ni柱中的氯化鎳或者硫酸鎳可以也可以與咪唑結(jié)合這時(shí)候再用咪唑洗脫，梯度洗脫，咪唑競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合到硫酸鎳上，目的蛋白就被洗脫了，這時(shí)候收集浸出液，那么里面就是要的目的蛋白，然后透析掉咪唑就行了。

現(xiàn)在的柱子大多是預(yù)裝柱，也就是不用自己填柱，就是裝好鎳的傻瓜柱，也不貴，上樣，洗脫，基本兩個(gè)步驟就結(jié)束了。

剩下的看怎么處理了。

npy是什么意思

NPY（Neuropeptide Y，神經(jīng)肽Y）由下丘腦分泌，是一種多肽，由三十六個(gè)氨基酸構(gòu)成。

NPY是一個(gè)36個(gè)氨基酸的肽，廣泛分布于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)。許多證據(jù)表明NPY在體重調(diào)節(jié)中起到重要的作用，NPY最主要的作用是增加食物的攝入，降低飽食動(dòng)物的產(chǎn)熱效應(yīng)。

NPY的相關(guān)發(fā)現(xiàn)：

2016年12月27日Front Aging Neurosci雜志發(fā)表了題為“神經(jīng)肽Y（NPY）mRNA表達(dá)水平在不同抑郁癥類型中的鑒別作用”的文章。該研究是袁勇貴主任醫(yī)師及其團(tuán)隊(duì)的系列研究之一，通過入組159例受試者，其中PSD患者39例，卒中非抑郁（Non-PSD）患者42例，抑郁癥（major depressive disorder，MDD）患者40例和正常對(duì)照（normal control，?NC）組38例，探討外周血NPY在PSD中的發(fā)生作用。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)與NC組相比，PSD和Non-PSD蛋白水平顯著降低；與MDD組相比，PSD和Non-PSD組NPY mRNA水平顯著升高。

以上內(nèi)容參考：

百度百科-NPY

如何用氨基酸序列設(shè)計(jì)引物啊，設(shè)計(jì)好的引物如何評(píng)判，可以與相應(yīng)的核酸序列作對(duì)比以改進(jìn)嗎？

首先你得氨基酸序列是不是已知蛋白的序列，也就是在GENE BANK里能不能找到你的氨基酸對(duì)應(yīng)的蛋白，如果知道是什么蛋白，那么就用該蛋白對(duì)應(yīng)的DNA序列設(shè)計(jì)引物，設(shè)計(jì)引物可以用Primer軟件，至于引物的評(píng)分可以參照軟件給出的一些參數(shù)，比如是否有DIMER形成，TM值，有無錯(cuò)配等等。選擇評(píng)分比較高的引物，進(jìn)行合成，然后PCR擴(kuò)展試試，看看目的條帶能不能出來，事實(shí)說話，擴(kuò)得出來且沒有雜帶就是好的引物。

如果，你的氨基酸序列是未知蛋白的序列，那么你就得麻煩點(diǎn)了：1.從氨基酸序列中選擇氨基酸對(duì)應(yīng)密碼子種類比較少的一段設(shè)計(jì)引物.2.考慮到密碼子偏好性，如同一氨基酸的密碼子，在不同物種中對(duì)某種密碼子偏好。3.如果某個(gè)氨基酸的密碼子有四種可能，那就在引物中使用I。4.為了降低引物的兼并性，提高PCR反應(yīng)的特異性，設(shè)計(jì)多條引物分別擴(kuò)增。5.設(shè)計(jì)一條兼并引物以后，另一條引物可以使用oligodT，如果要做5‘RACE，可以考慮使用clotech的SMART cDNA amplification Kit。

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NRAS KIT MET三種基因突變分別代表什么？

一般來說，基因突變有三種形式：

1、錯(cuò)義突變：

由于一對(duì)或幾對(duì)堿基對(duì)的改變而使決定某一氨基酸的密碼子變成決定另一種氨基酸的密碼子的基因突變叫錯(cuò)義突變。

這種基因突變有可能令它所編碼的蛋白質(zhì)部分或完全失活，比如人血色素β鏈的基因假若將決定第6位氨基酸（谷氨酸）的密碼子由CTT變成CAT，就可使它合成出的β鏈多肽的第6位氨基酸由谷氨酸變成纈氨酸，從而造成鐮刀形細(xì)胞貧血病。